在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，精準(zhǔn)地操控基因是解析其功能、探索疾病機(jī)制乃至開(kāi)發(fā)新型療法的基石。其中，基因敲除（或敲低）技術(shù)作為核心手段，歷經(jīng)多年發(fā)展，已形成以病毒包裝，特別是慢病毒包裝為主導(dǎo)的高效遞送體系。本文將探討病毒包裝如何驅(qū)動(dòng)基因敲除研究，并通過(guò)一篇最新高分文獻(xiàn)，展示其如何助力科學(xué)家揭示口腔鱗癌的免疫逃逸新機(jī)制。

1. 慢病毒包裝：實(shí)現(xiàn)高效基因遞送的核心技術(shù)

要實(shí)現(xiàn)基因敲除或敲低，首先需要將特定的基因操作工具（如shRNA、CRISPR-Cas系統(tǒng)）高效、穩(wěn)定地送入靶細(xì)胞內(nèi)部。病毒，作為一種天然的基因遞送專家，經(jīng)過(guò)科學(xué)家的改造，去除了復(fù)制和致病能力，保留了高感染效率的特性，從而成為理想的“運(yùn)載工具”。

• 高效感染：病毒能感染多種難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)元等。
• 穩(wěn)定表達(dá)：某些病毒（如慢病毒）能將目標(biāo)基因整合至宿主基因組，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期的基因表達(dá)或沉默。
• 應(yīng)用廣泛：從基礎(chǔ)的基因功能研究到前沿的基因治療、細(xì)胞治療，病毒包裝技術(shù)都是不可或缺的核心平臺(tái)。

2. 精準(zhǔn)靶向的強(qiáng)力組合

在眾多病毒工具中，慢病毒因其能感染分裂與非分裂細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期、穩(wěn)定的基因表達(dá)，成為進(jìn)行基因敲除或敲低研究的首選載體之一。其應(yīng)用于基因敲除或敲低（以 shRNA 技術(shù)路線為例）的典型流程如下：

1. 設(shè)計(jì)并合成靶向目的基因的 shRNA 序列

2. 將 shRNA 序列克隆至慢病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒

3. 利用三質(zhì)?；蛩馁|(zhì)粒系統(tǒng)，共轉(zhuǎn)染 HEK293T 等包裝細(xì)胞，進(jìn)行慢病毒包裝與生產(chǎn)

4. 收集含有慢病毒顆粒的上清液，并進(jìn)行濃縮、純化與滴度測(cè)定

5. 用慢病毒感染靶細(xì)胞，通過(guò)抗性篩選獲得穩(wěn)定敲低的細(xì)胞株

這套成熟的技術(shù)路線，為研究人員提供了穩(wěn)定可靠的基因敲除細(xì)胞模型，是進(jìn)行后續(xù)功能驗(yàn)證、信號(hào)通路研究、藥物靶點(diǎn)篩選的堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

3. 文獻(xiàn)解析：揭示OSCC免疫逃逸新機(jī)制

一篇2025年發(fā)表于《Research》雜志上的題為《DDX10 Exacerbates Exosomal PD-L1-Dependent T Cell Exhaustion via Phase Separation of Rab27b in Oral Squamous Cell Carcinoma》的研究，正是運(yùn)用了shRNA慢病毒敲低技術(shù)。

01. 研究核心內(nèi)容

該研究旨在揭示 RNA 解旋酶 DDX10 在口腔鱗癌（OSCC）中的未知功能。研究人員發(fā)現(xiàn)：DDX10 在 OSCC 中高表達(dá)，且與患者不良預(yù)后密切相關(guān)。

DDX10 通過(guò)液-液相分離與調(diào)控外泌體分泌的關(guān)鍵蛋白R(shí)ab27b結(jié)合。

此結(jié)合促進(jìn)了攜帶免疫抑制分子 PD-L1 的外泌體的分泌，從而導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞功能耗竭，助力腫瘤免疫逃逸。

02. 研究的創(chuàng)新點(diǎn)

機(jī)制創(chuàng)新：首次將DDX10的相分離行為與其在腫瘤免疫逃逸中的功能聯(lián)系起來(lái)，為理解OSCC的耐藥性提供了全新視角。

靶點(diǎn)創(chuàng)新：明確了DDX10是通過(guò)調(diào)控外泌體PD-L1來(lái)抑制T細(xì)胞功能的關(guān)鍵上游因子，為其作為OSCC免疫治療新靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。

03. 泓迅生物shRNA慢病毒的關(guān)鍵作用

在該研究中，為了驗(yàn)證DDX10的功能，研究者采用了由泓迅生物提供的專業(yè)shRNA慢病毒遞送服務(wù)，構(gòu)建了穩(wěn)定敲低DDX10的OSCC細(xì)胞系。

體內(nèi)外功能驗(yàn)證：穩(wěn)定敲低DDX10的細(xì)胞在體外表現(xiàn)出增殖、遷移和侵襲能力顯著下降；在小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)中，腫瘤生長(zhǎng)也被明顯抑制。

機(jī)制深入探索：基于可靠的敲低模型，研究者才能進(jìn)一步通過(guò)Co-IP、RNA-Seq、外泌體分析等手段，層層深入地揭示出DDX10→相分離→Rab27b→外泌體PD-L1→T細(xì)胞耗竭的完整信號(hào)軸。

4. 超越敲除：慢病毒包裝的應(yīng)用領(lǐng)域

除了shRNA介導(dǎo)的基因敲低，慢病毒包裝技術(shù)在遺傳操控領(lǐng)域還有著更為廣闊的應(yīng)用：

• CRISPR-Cas9基因編輯：遞送Cas9核酸酶與sgRNA，實(shí)現(xiàn)基因的敲除、點(diǎn)突變或精準(zhǔn)插入。
• 基因過(guò)表達(dá)：用于功能獲得性研究，或表達(dá)報(bào)告基因（如GFP）、特定蛋白。
• 基因治療：作為載體，用于治療遺傳性疾病（如地中海貧血）、CAR-T細(xì)胞治療等。
• 疾病模型構(gòu)建：用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型或在類器官中模擬疾病狀態(tài)。
• 全基因組篩選：構(gòu)建大規(guī)模的shRNA或 CRISPR 文庫(kù)，用于發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點(diǎn)或信號(hào)通路。

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Reference

[1] Li, B., Cui, H., Liu, W., et al. DDX10 Exacerbates Exosomal PD-L1-Dependent T Cell Exhaustion via Phase Separation of Rab27b in Oral Squamous Cell Carcinoma. Research, 2025 May 9;8:0697.