1、利用RNP下的雙sgRNA編輯法，實現(xiàn)基因DNA水平片段敲除
案例：對X細胞的A基因進行Exon1-13的片段敲除（KO）
（1）在需求敲除片段兩端分別設計1條高靶向的sgRNA序列，如下圖：
（2）將gRNA-A1、gRNA-A2進行化學修飾合成后分別與Cas9蛋白組裝成RNP，轉染至X細胞進行A基因片段序列敲除；
（3）敲除結果檢測如下：
DNA水平-Sanger測序顯示，A基因序列已被敲除，結果如下：
細胞表型檢測如下圖：A為正常細胞，B為A基因敲除后的突變細胞形態(tài)，表明A基因被敲除。
2、RNP敲除效率遠超傳統(tǒng)質粒法
案例：以AAVS1位點敲除為例，比較質粒（DNA）與RNP的敲除效率
（1）將AAVS1-sgRNA1序列構建帶有Cas9的載體中，轉染細胞后提取基因組DNA，以基因組DNA為樣本進行Sanger測序并結合Synthego ICE分析軟件檢測，結果顯示敲除率為14%；
（2）將AAVS1-sgRNA1 RNP復合物轉染細胞后進行如（1）所述檢測，結果顯示敲除效率為69%；
（3）敲除效率比較（如下圖），結果顯示RNP敲除效率是質粒法的4-5倍，顯著高于質粒法。
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