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A:常規(guī)引物150nt以下;修飾引物140nt;ssDNA可以合成4K;RNA合成到110nt;基因合成相關(guān)服務(wù),目前已完成的最長是24K,在構(gòu)建幾個30K的基因。
(1) 一般PCR擴增60base PAGE plus/60base PAGE
(2) 診斷PCR擴增 40base PAGE plus
(3) DNA測序20base左右PAGE plus
(4) 亞克隆,點突變等根據(jù)實驗要求定PAGE plus, PAGE,HPLC
(5) 基因構(gòu)建(全基因合成)根據(jù)實驗要求定PAGE plus,PAGE
(6) 反義核酸根據(jù)實驗要求定PAGE-plus PAGE
(7) 修飾引物根據(jù)實驗要求定PAGE,HPLC
此外, SIMA與HEX的顏色是一致的,F(xiàn)ITC與FAM的顏色是一致的
A:例FAM、VIC、生物素、CY5、TXR等修飾。
A:一般兩端都帶修飾的引物會提供質(zhì)譜報告,其他服務(wù)都不包含質(zhì)譜報告。
(1) 干燥制品很穩(wěn)定,常溫下數(shù)個月無問題。但為保證萬無一失,放置于-20℃保存為好。
(2) 溶解后的溶液DNA短期內(nèi)(1-2周)使用可放置在4℃下保存,長期保存請放置于-20℃。避免反復(fù)凍融,液體可分裝成多份保存。(溶解DNA時,請注意使用無菌、無核酸酶的水或TE Buffer)。
(3) 熒光標(biāo)記引物請避光保存。
300余種。
根據(jù)實驗?zāi)康拇_定。以20個堿基左右引物為例:常規(guī)PCR擴增,可選擇5 nmol(約合1 OD),可做200次50 μl標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng);基因拼接或退火后做連接,可選擇5 nmol(約合1 OD)。
用紫外分光光度計在260 nm波長測定溶液的吸光度來定量,測定時溶液的吸光度最好稀釋到0.2-0.8之間(吸光度太高或太低會有較大的誤差)。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后,取部分溶液稀釋到1 ml并在1 ml標(biāo)準(zhǔn)比色皿中測定其吸光度,即為所測體積的OD值,進而可以計算出母液的OD值。
泓迅發(fā)貨的Oligo產(chǎn)品,發(fā)貨管標(biāo)簽及COA報告均已定量,且已給出建議加水量,以方便客戶實驗,可以直接參照報告數(shù)值,計算獲得濃度等各參數(shù)。
(1) 引物和模板是否配對,檢查引物3’端15bp堿基是否與模板序列完全匹配;
(2) 引物本身是否有發(fā)夾結(jié)構(gòu)或高GC,poly結(jié)構(gòu)等;
(3) PCR反應(yīng)試劑或PCR儀是否能正常工作;
(4) PCR反應(yīng)條件是否合適;
(5) 對照是否正常擴增。